大家好，我是小前，我来为大家解答以上问题。肿瘤细胞培养步骤，细胞培养步骤很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

1、一、 复苏 1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。

2、液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

3、 2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。

4、 3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。

5、吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

6、 4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

7、 5. 3天换一次培养基。

8、 二、 传代 1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

9、 2. 把原有培养基吸掉。

10、 3. 加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。

11、 4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

12、 5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

13、 6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

14、 7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

15、 8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。

16、一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。

17、继续培养。

18、 三、 冻存 把细胞消化下来并离心（同上）。

19、用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。

20、4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。

21、 冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

22、 要注意的就是无菌操作！。

本文到此讲解完毕了，希望对大家有帮助。