双缩脲试剂检测蛋白质(双缩脲)
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斐林试剂和双缩脲试剂区别
1、试剂的浓度和配制方法不同
斐林试剂:甲液:0.1g/mL的NaOH溶液;乙液:0.05g/mL的 溶液。
使用前临时配制,在2mL的甲液中滴入4滴~5滴乙液,振荡使混合均匀后即可。
双缩脲试剂:A液:0.1g/mL的NaOH溶液;B液:0.01g/mL的 溶液。
分别配制好A液和B液即可。
2、试剂的作用和鉴定原理不同
斐林试剂:
作用:可鉴定可溶性还原糖。
原理:甲液和乙液混合后产生 沉淀, 与含醛基(—CHO)的可溶性还原糖,在加热条件下反应,将 还原为砖红色的 沉淀。
双缩脲试剂:
作用:可鉴定蛋白质溶液。
原理:在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲( )能与 反应,形成紫色络合物。由于蛋白质分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键(—CO—NH—),因此,蛋白质都可以与双缩脲试剂发生反应而使溶液呈现紫色。
3、试剂的使用方法不同
斐林试剂:使用时现配现用,要水浴加热。如果斐林试剂放置一段时间,因 沉淀在溶液底部而无法使用。使用时,甲液和乙液不可分别加入到待测液中,否则,待测液(苹果组织样液)中的有机酸会中和NaOH,使产生的 不足而影响鉴定。
双缩脲试剂:使用时,双缩脲试剂A液和双缩脲试剂B液要分别先后加入到待测液中,不需要加热。双缩脲试剂A液和双缩脲试剂B液不可以混合后再加入待测液。如先混合,则会产生 沉淀而无 产生。加入的双缩脲试剂B液( )也不能过量,否则蓝色的 会遮盖产生的紫色。
4、反应中出现的颜色不同
斐林试剂鉴定可溶性还原糖,出现的颜色变化为:浅蓝色→棕色→砖红色。
待测液加入刚配制的斐林试剂,溶液是浅蓝色;水浴加热后,一部分 被还原为砖红色的 ,溶液呈现两种颜色的混合色——棕色;随着反应的完成, 全部被还原为 ,溶液呈砖红色。
双缩脲试剂鉴定蛋白质,出现的颜色变化为:无色→浅蓝色→紫色。
加入双缩脲试剂A液,溶液无色;再加入双缩脲试剂B液,有 形成,溶液呈浅蓝色;振荡均匀后,反应完成,溶液呈紫色
希望我的答案,会个你有帮助,记住我,逆龙志
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